欧美疯狂性受xxxxx另类_专干老肥熟女视频网站_国产无遮挡吃胸膜奶免费看_国产农村乱辈无码_女邻居的大乳中文字幕

提供商:         上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:       PKC活性檢測實驗
規(guī)格:           實驗服務(wù)
價格：          200元
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
更多實驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!

 PKC活性檢測實驗
 
實驗試劑: 瓊脂糖(Promega公司，V3125) ;其他常備試劑購自sigma公司; PKC活性檢測試劑盒(Promega公司，V5330)
實驗儀器:電泳儀(北京六一廠，112-0640) ;水平電泳槽(北京六一廠，122-3146) ;電熱恒溫培養(yǎng)箱(碧云天生物，EBI025) ;電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠，HH-8)
基本原理:分離PKC蛋白(磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白)，利用試劑盒組分將2種蛋白分離并加以區(qū)分,利用電泳瓊脂糖凝膠技術(shù)顯示2種不同的蛋白，利用分析軟件將顯示的不同蛋白定量并加以比較，以磷酸化PKC非磷酸化PKC灰度值IOD的比值顯示PKC活性(PKC活化度)。
 
操作步驟:
1.用預(yù)冷的勻漿器把細胞勻漿。
2.在4°C，用14,000 xg離心裂解液5分鐘，保存上清。
3.用PKC抽提液預(yù)平衡1ml的DEAE纖維素柱，再把第2步中得到的上清過柱。用5m的PKC抽提液洗柱子，然后用5ml含有200mM NaCI的PKC抽提液洗脫含有PKC的組分。
4.用PKC稀釋液(PKC dilution buffer)將少量蛋白激酶C (Promtein Kinase C)稀釋到2 .5ug/ml.隨試劑盒所附的產(chǎn)品信息中標(biāo)有這個酶的初始濃度。
5.用探頭超聲波破碎儀超聲處理PKC Activator Solution 20-30秒,或直到溶液變溫暖。
6.對每一個樣品，按照下面所列順序在0.5ml小離心管中混合PepTag@ PKC 5x Buffer,PepTag@ C1Peptide,超聲過的PKC Activator 5X Solution,和水。在樣品加入之前，小離心管--直要放在冰上。陰性對照將用于對反應(yīng)進行定量時確定其摩爾吸收值(說明書第IV部分) 。
 
標(biāo)準(zhǔn)PKC檢測
PepTag@ PKC Reaction 5X Buffer           5ul
PepTag@ C1 Peptide (0.4ug/ul)            5ul
PKC Activator 5X Solution,超聲處理的      5ul
短肽保護液(非必須)                    1ul
樣品                                 9ul
去離子水使終體積為                   25ul
 
PKC陽性對照檢測
PepTag⑧PKC Reaction 5X Buffer          5ul
PepTag@ C1 Peptide (0 4ug/ul)           5ul
PKC Activator 5XSolution,超聲處理的      5ul
短肽保護液(非必須)                   1ul
Protein Kinase C (2.5ug/ml溶于PKC dilution bufer)     4ul
去離子水使終體積為                  25ul
 
PKC陰性對照檢測(不加PKC)
PepTag@ PKC Reaction 5X Buffer         5ul
PepTag@ C1 Peptide (0 4ug/ul)          5ul
PKC Activator 5XSolution,超聲處理的     5ul
短肽保護液(非必須)                  1ul
去離子水使終體積為               25ul
 
7.在0時間點，把--支管子從冰上移到30°C水浴中孵育2分鐘。然后加入樣品或蛋白激酶C在30°C再孵育30分鐘。
8.把管子放進開水浴或95°C加熱塊10分鐘以終止反應(yīng)。在凝膠電泳前把樣品--直避光存放在4°C或-20°C。
9.把樣品上樣到膠上之前，往每個樣品中加進1ul的80%甘油，以確保樣品保留在上樣孔中(說明書第II.F部分)。
10.每孔點樣10ul,在0. 8%瓊脂糖凝膠上以100V電泳15分鐘分開樣品，拍照。
 
檢測結(jié)果:
說明:后面2組泳道“陽性(PC)"和“陰性(NC)"為試劑盒自帶系統(tǒng)對照。
注:陽性條帶以Gel pro4版凝膠光密度分析軟件進行分析,測其IOD (integrated optical density)累積光密度參考值。按照百分比例計算PKC活性百分比
(以陽性對照I0D值為100，其余各組的PKC+ p-PKC總和為100分配IOD數(shù)值)
 
 
 
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗代做：

Elisa免費代做	Wb代做	蛋白芯片定制	石蠟冰凍切片
HE染色	透射電鏡	掃描電鏡服務(wù)	免疫共沉淀
流式細胞分選	CCK8檢測代做	組織芯片微陣列	免疫細胞化學(xué)ICC
熒光染料標(biāo)記	油紅O染色	免疫熒光染色	免疫共沉淀（Co-IP）實驗
熒光定量PCR	探針合成	酪蛋白酶譜MMP	免疫組化IHC
激光共聚焦	蛋白雙向	蛋白相互作用	課題協(xié)助外包
CBA流式多因子	瓊脂糖凝膠電泳	疾病模型	藥理毒理