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雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒
產(chǎn)品編號:LDS1088CPK
別名 雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒 
英文名  
雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒
中文名稱:雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒
中文別名:雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒
產(chǎn)品類別:脾臟單個核細胞的分離
 
產(chǎn)品編號:LDS1088CPK
 
產(chǎn)品名稱:雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格:200ml/KIT
 
產(chǎn)品價格:¥650.00元
 
本品用于分離雞脾臟單個核細胞

 
“XXXX”動物脾臟組織單個核細胞分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號:TBD0023SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
 
  名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格
       
A XXXX 動物脾臟組織單個核細胞分離液   200ml
       
B 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D F 液(贈品) F2013TBD 200ml
E 說明書   1 份
       
 
【實驗前準備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
  • 首先制備脾臟組織單細胞懸液,制備方法詳見“脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)”。
 
  • 取一支 15ml 離心管,加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液(注:分離液最少不得少于 3ml)。
  • 用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min。(注:根據(jù)脾臟組織單細胞懸液量確定離心條件,脾臟組織單細胞懸液量越大,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
  • 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中,向離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
  • 250g,離心 10min。
 
  • 棄上清。
 
  • 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
 
分離圖例
 
 
 
 
【注意事項】
 
  • 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果,最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗,樣品存放時間越長,細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
  • 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
  • 吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。
 
  • 分離液用量大于制備的脾臟組織單細胞懸液樣本時,分離效果更佳。
 
  • 如實驗后細胞得率或活性過低,請聯(lián)系上海研謹技術(shù)以尋求支持幫助。
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
 
本實驗單個核細胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。
 
             
  紅細胞   白細胞     血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細胞 淋巴細胞   單核細胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40%   3%-8%  
             
 
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
 
  • 脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。
 
  • 所獲得單個核細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
  • 所獲得單個核細胞的核酸提取技術(shù)。
 
  • 所獲得單個核細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案
     
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當增減轉(zhuǎn)速
   
離心后目的細胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環(huán)層彌散 細胞密度過大 調(diào)整細胞密度
   
離心后白環(huán)層太淺或看不見 細胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
 
  • 本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
 
能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到最佳分離效果,離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
 
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