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產(chǎn)品類別：脾臟單個核細胞的分離 產(chǎn)品編號：LDS1077PK 產(chǎn)品名稱：狗脾臟單個核細胞分離液試劑盒 產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT 產(chǎn)品價格：￥650.00元 本品用于分離狗脾臟單個核細胞 “XXXX”動物脾臟組織單個核細胞分離液實驗方法 技術(shù)文檔編號：TBD0023SOP 【產(chǎn)品規(guī)格】 200ml/Kit 【產(chǎn)品組成】 為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下： 名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格 A XXXX 動物脾臟組織單個核細胞分離液 200ml B 樣本稀釋液（贈品） 2010C1119 200ml C 清洗液（贈品） 2010X1118 200ml D F 液（贈品） F2013TBD 200ml E 說明書 1 份 【實驗前準備】 適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機 【檢驗方法】 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。 首先制備脾臟組織單細胞懸液，制備方法詳見“脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)”。 取一支 15ml 離心管，加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）。 用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據(jù)脾臟組織單細胞懸液量確定離心條件，脾臟組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。 250g，離心 10min。 棄上清。 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。 250g，離心 10min。 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。 分離圖例 【注意事項】 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。 吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。 分離液用量大于制備的脾臟組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系上海研謹技術(shù)以尋求支持幫助。 【儲存條件及有效期】 常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。 【參考值（參考范圍）】 本實驗單個核細胞提取率及純度大于 80%。 下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進行參考。 紅細胞 白細胞 血小板 （4.0-10.0）×109 含量（個/L） （4.0-5.5）×1012 中性粒細胞 淋巴細胞 單核細胞 （1.0-3.0）×1011 50%-70% 20%-40% 3%-8% 【相關(guān)實驗技術(shù)方案】 脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。 所獲得單個核細胞的培養(yǎng)技術(shù)。 所獲得單個核細胞的核酸提取技術(shù)。 所獲得單個核細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù) D.PCR 技術(shù) 【可能存在的問題及解決方法】 1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示： 出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 離心后目的細胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 離心后白環(huán)層彌散 細胞密度過大 調(diào)整細胞密度 離心后白環(huán)層太淺或看不見 細胞密度過小 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可 能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。 注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。