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熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT
產(chǎn)品編號:TBD2013LPA
別名 熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT 
英文名  
熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT
中文名稱:熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT
中文別名:熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT
產(chǎn)品類別:骨髓淋巴細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號:TBD2013LPA
 
產(chǎn)品名稱:熊貓骨髓淋巴細(xì)胞分離液KIT
 
產(chǎn)品規(guī)格:200ml/KIT
 
產(chǎn)品價(jià)格:¥1200.00元
 
本品用于分離熊貓骨髓淋巴細(xì)胞



 
“XXXX”動物骨髓淋巴細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
技術(shù)文檔編號:TBD0020SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
 
  名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格
       
A XXXX 動物骨髓淋巴細(xì)胞分離液   200ml
       
B 樣本稀釋液(贈品) 2010C1119 200ml
       
C 清洗液(贈品) 2010X1118 200ml
       
D F 液(贈品) F2013TBD 200ml
       
E 說明書   1 份
       
 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
  • 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液,制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
 
  • 取一支 15ml 離心管,先加入與骨髓單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液最少不得少于 3ml)。
  • 用吸管小心吸取骨髓單細(xì)胞懸液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min(注:根據(jù)骨髓單細(xì)胞懸液量確定離心條件,樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到最佳分離效果)。
 
  • 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
 
  • 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中,往所得離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
  • 250g,離心 10min。
 
  • 棄上清。
 
  • 用吸管以 5-10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
 
  • 250g,離心 10min。
 
  • 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
 
 
 
【注意事項(xiàng)】
 
  • 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣本存放時間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣本放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
 
  • 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
 
  • 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。
 
  • 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時,分離效果更佳。
 
  • 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請聯(lián)系技術(shù)以尋求幫助.
 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
 
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
 
 
             
  紅細(xì)胞   白細(xì)胞     血小板
           
    (4.0-10.0)×109  
含量(個/L) (4.0-5.5)×1012 中性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞   單核細(xì)胞 (1.0-3.0)×1011
    50%-70% 20%-40%   3%-8%  
             
 
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
 
  • 骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
 
  • 所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
  • 所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
 
  • 所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 
出現(xiàn)情況 出現(xiàn)原因 建議解決方案
     
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
   
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
 
     
離心后白環(huán)層彌散 細(xì)胞密度過大 調(diào)整細(xì)胞密度
   
離心后白環(huán)層太淺或看不見 細(xì)胞密度過小
 
     
 
  • 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,恒定離心時間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
 
  • 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
 
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到最佳分離效果,離心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。
 
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